空氣中奈米微粒細胞株毒性評估方法探討(二)-黃100年度研究計畫H324

　　作業場所暴露奈米微粒之風險，為奈米安全衛生重要議題，一般建議首先採取體外細胞株實驗模式來篩選奈米微粒之風險。然而在現今研究奈米微粒毒性的報導中，我們不乏看到存在著不一致或互相矛盾的結果，原因可能是使用不同特性的奈米微粒，或是使用不同的實驗條件及檢測方法，為避免造成困擾，國際上已有標準測試方法發表，但仍被討論，特別是採用粉體泡製溶液方式與直接使用空氣中微粒進行試驗之異同。為了能使我們更加瞭解奈米微粒的危害測試方法，並將這些資訊應用在分級管理上，希望能建立更穩定、快速及可測試大量奈米微粒樣品的篩選平台，另開發空氣中微粒收集方式或直接應用空氣中微粒進行細胞株危害測試方法，進而比較與傳統粉體細胞株危害測試之差異。

　　計畫整理一般所使用的細胞毒性試驗方法及其限制，並且針對目前所使用的細胞毒性試驗方法提出綜合概述，進一步將特殊奈米微粒特性會干擾其特定測試系統的資料作集中整理與測試。計畫也評估微粒進行毒性研究較佳的in vitro方法之「空氣中直接進行細胞株危害性測試」，透過收集整理目前空氣中微粒進行細胞株危害性測試方法，並評估各方法在用於奈米微粒的可行性。

　　研究結果顯示，NIH 3T3細胞會對奈米銀微粒進行吞噬的作用並形成自體吞噬的空泡。隨著給與奈米銀微粒的劑量上升，Trypan blue和MTT的分析方法顯示細胞存活率會隨之下降。Live/Dead細胞存活分析法在螢光顯微鏡下觀察，可以發現低劑量的暴露與Trypan blue 和MTT有相類似的結果。生物冷光細胞毒性測試法是具有高靈敏度的分析方法，然而在本計畫的研究結果中，於奈米銀微粒暴露的不同組別中尚未有明確的細胞毒性測試結果。

　　計畫已收集整理目前空氣中微粒進行細胞株危害性測試方法，提出可行之技術並試行所建議之空氣中奈米微粒直接進行細胞株危害性測試方法，已設計建立一靜電收集式的細胞株暴露氣懸微粒系統，並利用微粒電移動度掃瞄分徑器(SMPS)量測微粒通過暴露腔時之貫穿率以推估細胞株之微粒暴露量，同時分別針對各個操作條件及可能影響因素進行研究。未來若能依此而改進，將可建立更精確、更具代表性、更簡易之評估作業場所空氣中微粒影響細胞株狀況之測試方法，應用奈米微粒細胞株危害測試結果進行危害分級管理之參考。