普通微生物學實驗

本教材由十六個實驗所編成，適用於一學期的課程，其中每一實驗又分為許多小實驗，可視上課時數與需要而加以選擇。內容方面，在微生物觀察部分，包括了顯微鏡的使用與染色技術的熟練，培養部份是以細菌的培養為主，介紹培養基的種類與特性，主要藉由實驗的操作，學得培養基的配法，細菌的無菌操作技巧與純菌的分離方法，細菌的分離方法，細菌生長的測定，則在瞭解影響生長的因素及控制生長的方法，而細菌的代謝，在熟悉一般的免疫反應，進而認識常用的免疫檢測法。整體而言，本教材的規劃由淺入深，採漸進式的設計，使用者依序漸次學習，必具備豐富且實用的微生物技巧。

楊美桂　

台灣大學植物研究所博士、美國印第安那大學醫學院病理系教授

曾任  輔仁大學生命科學系助教、講師、副教授、教授兼系主任　

第三版序
本「普通微生物學實驗」內容之規劃與編寫，主要配合「微生物學」教學之需要；自出版以來，承蒙各校生命科學相關科系所採用，讓本人感懷於心，在不斷的修正下，而有了第三版。

有別於本書再版時的大幅度更新，本版主要將每一實驗之內容重新審閱，找出說明不夠清楚或遺漏之處，重做調整及補充，希望讓本書能達盡善盡美，嘉惠更多有心學子。

由於輔仁大學生命科學系（原生物系）與食品科學系以及營養科學系的厚愛，本人得有機會持續為學生講授「微生物學」。近四十年來，在多位助教大力配合與辛苦協助下，讓「微生物實驗」這門課不斷的增長，也是本書實際運作的幕後功臣；而歷年來眾多學生對微生物實驗的興趣與肯定，在教學相長下提供本書修正之原動力；加上藝軒圖書公司這麼多年來的鼎力支持與熱心推廣，本書才能持續出版與更新。如此的眾緣和合，本人編寫本書之原意及精神方得以徹底落實。茲以此書修正後重新出版而以為序。

楊美桂

輔仁大學生命科學系教授

實驗一：微生物實驗簡介
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 微生物實驗室安全守則　
　　2. 微生物實驗使用之儀器介紹　
　　3. 微生物實驗其他注意事項
　
實驗二：微生物之觀察
一、目的　
二、材料與設備　
　　1. 菌　種　
　　2. 設　備　
三、方法與步驟　
　　1. 光學顯微鏡之構造與使用　
　　2. 電子顯微鏡之介紹　
　　3. 細菌菌落與細胞之觀察　
　　4. 真菌菌絲之觀察　
四、結果　
五、問題思考與討論　

實驗三：細菌的染色方法
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 玻片塗抹法　
　　2. 簡單染色法　
　　3. 革蘭氏染色法　
　　4. 內孢子染色法　
　　5. 負染色法　
四、結果　
五、問題思考與討論　

實驗四：細菌的培養
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 培養基的種類與配製　
　　　培養基的定義　
　　　培養基的種類　
　　　培養基的配製　
　　 2.細菌之接種方法　
　　　菌落懸浮法　
　　　劃線法　
　　　塗抹法　
　　　穿刺法　
　　3. 細菌之分離與純培養　
　　　分區劃線法　
　　　稀釋塗抹法　
　　　倒皿法　
四、結果　
　　1. 細菌的接種方法　
　　2. 細菌之分離與純培養　
五、問題思考與討論
　
實驗五：細菌的生長
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 細菌生長之測定　
　　　顯微鏡下細菌數目的計算法　
　　　菌落之觀察與菌數計算法　
　　　混濁度觀察與計算法　
　　2. 影響細菌生長的因素　
　　　培養基酸鹼值（pH值）　
　　　培養之溫度　
　　　含氧量　
　　　無氧培養　
四、結果　
　　1. 細菌生長之測定　
　　2. 影響細菌生長的因素　
五、問題思考與討論　

實驗六：細菌生長的控制
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 細菌生長曲線的測定　
　　2. 以物理方法控制細菌的生長　
　　　高溫處理法　
　　　紫外線照射法　
　　　過濾法　
　　3. 以化學藥劑控制細菌的生長　
　　　殺菌劑對細菌的作用　
　　　抗生素感受性試驗　
四、結果　
　　1. 細菌的生長曲線圖　
　　2. 物理控制法　
　　3. 化學控制法　
五、問題思考與討論　

實驗七：細菌的代謝作用
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 醣類的分解　
　　　澱粉水解試驗　
　　　醣類發酵作用　
　　　MR-VP試驗　
　　2. 蛋白質的分解　
　　　果膠之分解　
　　　酪蛋白之分解　
　　　Indole之形成　
　　　硫化氫（H2S）之形成　
　　　脂質的分解　
四、結果　
　　1. 醣類之分解　
　　2. 蛋白質的分解　
　　3. 脂質的分解　
五、問題思考與討論　

實驗八：細菌的遺傳特性
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 細菌突變株的分離　
　　2. 細菌DNA的抽取　
　　　染色體DNA之抽取　
　　　質體DNA之抽取　
　　3. 細菌DNA的分析　
四、結果　
　　1. 細菌突變株的分離　
　　2. 細菌DNA分析　
五、問題思考與討論　

實驗九：細菌的轉形作用
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 大腸桿菌勝任細胞的製備　
　　2. 大腸桿菌之轉形作用　
　　3. 轉形菌的鑑定　
四、結果　
　　1. 轉形效率之測定　
　　2. 轉形菌DNA之分析　
五、問題思考與討論　

實驗十：真菌之培養與觀察
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 真菌之培養　
　　　酵母菌之培養　
　　　黴菌的培養─玻片培養法　
　　2. 真菌之觀察　
　　　空氣中真菌外形之觀察　
　　　酵母菌之觀察　
　　　黴菌之觀察　
四、結果　
五、問題思考與討論　

實驗十一：免疫學基本技術
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 凝集反應　
　　　玻片凝集試驗　
　　　試管凝集反應　
　　2. 沉澱反應　
四、結果　
　　1. 凝集反應　
　　2. 沉澱反應　
五、問題思考與討論　

實驗十二：常用的免疫檢測法
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 被動乳膠凝集試驗　
　　2. 免疫螢光法　
　　3. 酵素免疫法　
　　　直接ELISA法　
　　　間接ELISA法　
四、結果　
　　1. 被動孔膠凝集試驗　
　　2. 螢光抗體法　
　　3. ELISA反應　
五、問題思考與討論　

實驗十三：病毒學基本技術
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 噬菌體的培養　
　　2. 噬菌體效價之測定　
四、結果　
五、問題思考與討論
　
實驗十四：動物細胞的培養與病毒接種技術
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 白兔腎臟細胞的培養　
　　2. 病毒接種技術　
四、結果　
　　1. 腎臟細胞的培養　
　　2. 病毒之觀察以及TCID50之測定　
五、問題思考與討論　

實驗十五：環境中的微生物
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 飲水的衛生檢查　
　　　MPN試驗法　
　　　濾膜過濾法　
　　2. 食物的衛生檢查　
四、結果　
　　1. MPN試驗　
　　2. 濾膜過濾法　
　　3. 食物中總菌數之測定　
五、問題思考與討論　

實驗十六：病原性細菌的分離與鑑定
一、目的　
二、材料與設備　
三、方法與步驟　
　　1. 皮膚之細菌檢查　
　　2. 呼吸道的細菌檢查　
　　3. 消化道的細菌檢查　
四、結果　
　　1. 皮膚的細菌檢查　
　　2. 呼吸道的細菌檢查　
　　3. 消化道的細菌檢查　
五、問題思考與討論　

附　錄
一、染料　
二、培養基（總體積1000　mL）　
三、溶液